细胞克隆

细胞克隆：

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。

细胞克隆用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性。

克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

实验步骤：

1、获取样本，培养细胞。

2、调整细胞悬液密度为1×103个/mL细胞。

3、制备底层琼脂，完全溶化的5%琼脂和37℃左右预温的新鲜完全培养液以1：9比例在40℃均匀混合，加入培养皿（直径60mm）中，每皿含0.5%琼脂培养基2mL，室温下琼脂完全凝固。

4、制备上层琼脂，37℃密度每皿含200个的细胞悬液1.5mL移入小烧杯中，加入40℃、5%琼脂等体积混匀，即成0.25%半固体琼脂培养基。配好的半固体琼脂培养基立即加入铺有底层琼脂的培养皿中，室温下琼脂凝固。37℃、5%CO2静置培养2~3周。

5、当培养皿中出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养液，PBS液小心浸洗2次，空气干燥。甲醇固定15分钟，弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10分钟，流水缓慢洗去染液，空气干燥。

其他方法：

1、稀释铺板方法

2、饲养层克隆法

3、毛细管克隆法

4、荧光激活分选法