免疫细胞化学ICC

概述

免疫细胞化学（immunocytochemistry, ICC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定细胞内抗原的成分（主要是多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。

（一）免疫细胞化学对抗原和抗体的要求

1）对抗体的要求：纯度高、比活性强；

2）对抗原的要求：纯度高，免疫原性强，稳定无变化。

（二）免疫细胞化学抗原（antigen, Ag）

1）抗原的概念：

凡是在机体内引起体液免疫和（或）细胞免疫反应的物质，称为抗原。

抗原具有两个方面的特性：

①免疫原性：引起机体产生抗体和（或）致敏淋细胞的特性；

②免疫反应性：抗原能与相应的抗体及致敏淋巴细胞发生特异的结合或反应的特性。

2）根据抗原是否显示免疫原性分为：

①完全抗原：分子量较大，一般在10kDa以上，并具有较复杂的化学组成。

–免疫原性最强的是蛋白质抗原，多糖次之；脂类和核酸必需和蛋白质及多糖形成复合物才具有良好的免疫原性。

②半抗原：又称为不完全抗原，分子量较小。例如：某些短肽、多糖、类脂和药物等。

–半抗原必需与载体结合，才能获得免疫原性。

免疫细胞化学载体

通常是具有高度免疫原性的大分子物质，具有将免疫原性传递给耦联的半抗原能力。

常用的载体：钥孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin, KLH）、牛血清白蛋白（bovine serum albumin, BSA）、卵白蛋白（Ovalbumin, OVA）等。

（三）抗体（antibody, Ab）

1、概念：

①机体受到抗原刺激后，由浆细胞合成并分泌出一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白，被称为抗体。

②抗体主要存在于血清内；

③抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗体。

④免疫球蛋白根据重链的结构及抗原特异性不同分为五种，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。

2、常用的抗体：

单克隆抗体和多克隆抗体。

①单克隆抗体：是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，是应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备的。

–特异性强、抗体产量高。

②多克隆抗体：是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

–特异性低，会产生抗体的交叉反应。

–多克隆抗体广泛应用于石蜡包埋组织切片，可减少假阴性染色机会。

–抗原与抗体的结合，要求量保持一定比例，当抗原或抗体过量时，是不能聚合成大颗粒。

3、多克隆抗体的制备：

①动物的选择

②佐剂（adjuvant）

③免疫方法

④免疫剂量

⑤抗体效价的测定

⑥放血或定期抽血