时间：2022-8-22 14:46:33
白光拍照
白光拍照，即白光显微镜，是光学仪器的一种。以太阳光为光源，用以照射被检物体，使之发出白光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。
注意事项：
1、明确拍照部位；
2、明确拍照倍数（一般为40、100、200、400）；
3、明确分析内容。
扫描电镜
观察样品的表面形态，可对细胞粘附、表面形态等通过放大表面进行验证。
实验步骤：
1、固定：在通风橱中操作加入2%戊二醛固定液，放入真空抽泵机中抽真空，摇晃使得样品沉到瓶底；
2、漂洗：用PBS缓冲液漂洗样品，3次，每次10min；
3、脱水：配置30、50、70、80、90、100、100%乙醇溶液，对样品逐级脱水处理，每次10min；
4、置换：脱水15分钟后，样品过渡到乙酸异戊酯，置换2次，每次15min；
5、干燥：使用CO2临界点干燥仪对样品干燥，求尽量完好保存样品表面的精细结构
6、镀膜：用镊子轻轻将样品置于清洁的样品台上，用双面胶粘好，放入离子喷溅仪中，给样品渡金；
7、SEM观察：调焦获得清晰、特异性好的图像并拍照。
透射电镜
透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope, TEM）可以观察样品的内部精细结构，这些结构即亚显微结构或者超微结构。
透射电镜使用的是透射电子，并收集透过样品的电子，从而提供了样品的内部结构的信息，如晶体结构、形态以及应力状态的信息。
目前最先进的TEM其空间分辨率达到了pm级别。由于透射电子的要求，TEM的样品必须制备成超薄切片，通常为50~100 nm，样品制备比较繁琐。
常用的方法：超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。
实验意义：
1、透射电镜是表征各种样品的有力工具，它的多功能性和极高的空间分辨率使其在许多应用中非常有价值。
2、TEM能够观察样品的内部结构，同时在病理诊断中可以补充和纠正光镜诊断的疑难问题，可以提高病理诊断的准确性。
实验步骤：
透射电镜生物样品的制备：
（1）取小于1立方毫米的组织；
（2）用2.5%戊二醛（磷酸缓冲液配制）固定2小时，0.1M的磷酸缓冲液漂洗3次×15 min；
（3）1%锇酸固定液固定2小时，0.1M的磷酸缓冲液漂洗3次×15 min；
（4）梯度乙醇进行脱水，4℃进行；
（5）包埋：使用纯丙酮+包埋液（2:1）室温处理4小时，纯丙酮+包埋液（1:2）室温过夜，纯包埋液37℃处理3小时；
（6）固化：37度烘箱过夜，45度烘箱12小时，60度烘箱24小时；
（7）超薄切片机切片，厚度在50 nm左右；
（8）3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色；
（9）透射电镜观察，拍片。
