蛋白免疫印迹（WB ）

实验原理：

蛋白免疫印迹（ Western Blot, WB）采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

WB 是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。

一、蛋白样本提取制备

1 细胞或组织裂解

2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂

3 蛋白定量

4 电泳上样样品的准备

二、 电泳

1 PAGE 胶的制备

2 蛋白分子量 Marker

3 阳性对照

4 内参对照

5 上样与电泳

三、 转膜与显色（ Western Blot）

1 胶中蛋白的检测

2 蛋白转膜

3 膜上蛋白的检测：丽春红

4 膜的封闭

5 一抗的孵育

6 二抗的孵育

7 显色