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三条siRNA干扰片段合成,三保一

时间:2022-9-15 17:18:10

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。

基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:

TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;

PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。

RAN干扰技术包括化学合成小RNA片段(SiRNA)和构建载体RNA(SnRNA)两种形式。

 

 RNA干扰流程

 步骤一 确定干扰基因,设计并合成合适的小干扰RNA(片段型或载体型小干扰RNA)。

 步骤二 预转染实验,进行细胞培养,摸索转染条件、时间并进行必要的检测(WB,PCR 等),确定干预效果最佳的一对小RNA。

 步骤三 正式实验,设置合理实验分组,进行瞬时或稳定转染。

 步骤四 转染后检测,根据实验要求选择细胞生物学检测、蛋白检测、分子生物学检测等。以研究小干扰RNA对于细胞、蛋白或基因功能的影响。